TERAPIA GENÉTICA PARA LA HIPERTENSIÓN ARTERIAL

Mediante la utilización de piel humana (prepucio neonatal) modificada genéticamente (HSE)como un biorreactor para proporcionar factores terapéuticos, se demuestra la regulación de la presión arterial y la hipertensión sistémica al expresar el péptido natriurético auricular (ANP), una hormona capaz de disminuir la presión sanguínea. Además, la expresión de un gen marcador seleccionable, resistente a múltiples fármacos (MDR) tipo 1, se une a la expresión de ANP en un vector bicistrónico y se coexpresó en los queratinocitos humanos y fibroblastos de la HSE que se injertaron en ratones inmunocomprometidos. Los tratamientos tópicos de HSE injertado con el agente antimitótico colchicina se seleccionan para progenitores de queratinocitos que expresan tanto MDR como ANP. Se detectaron niveles plasmáticos significativos de ANP humano en ratones injertados con HSE que expresan ANP de queratinocitos o fibroblastos, y la selección tópica de HSE injertado dio como resultado altos niveles persistentes de expresión de ANP in vivo. Los ratones con niveles plasmáticos elevados de ANP humano mostraron niveles de renina más bajos y, correspondientemente, tenían una presión sanguínea sistémica más baja que los controles. Además, los ratones con injertos HSE que expresan ANP humano no desarrollaron presión arterial elevada cuando se les alimentó con una dieta alta en sal. Estos hallazgos ilustran el potencial de este enfoque de la terapia génica de la piel humana para entregar moléculas terapéuticas sistémicamente para el tratamiento a largo plazo de hipertensión arterial.

Kc humano y Fb están genéticamente modificados para expresar ANP y MDR y se utilizan para generar diferentes combinaciones de HSE. (A) Diferentes combinaciones de HSE que expresa ANP o MDR en Kc (Kc-ANP / Fb-MDR), Fb (Kc-MDR /Fb-ANP) o ambos (Kc-ANP / Fb-ANP). (B) áreas representativas de parafina, secciones de HSE normal generadas a partir de Kc y Fb sin traducir y diferentes combinaciones de HSE genéticamente modificado. Las flechas indican Fb expresando ANP.

La selección de colchicina aumentó la cantidad de células ANP-positivas y también la cantidad de pro-ANP secretada en medio de cultivo. (A) Se utilizó un ANP RIA para medir la cantidad de ANP humano secretado por HSE genéticamente modificado cultivado con (barra sólida) o sin (barra abierta) tratamiento de colchicina (10ng/mL). Las determinaciones se realizaron por duplicado y se repitieron varias veces con resultados similares. (B) Ensayo cGMP de niveles de pro-ANP en medio de cultivo desde el punto de vista genético, HSE modificado con (barra sólida) y sin preincubación (barra abierta) con la línea celular NCI-H1688 que expresa corina que puede convertir el pro-ANP en activo α-ANP. Se usó diez nM de vasopresina (VP) como control negativo y sodio 1 mM. nitroprusiato (SP) se usó como control positivo. (C) localización ANP en genéticamente HSE modificados que se seleccionaron con colchicina (+ col) o no se seleccionaron (- col) usando anticuerpo nti-ANP humano. Las flechas indican Fb que expresa ANP.

Referencias:

• Enfermedades Crónicas: Terapia génica para la hipertensión en parches de piel humana [Internet]. Medisur.sld.cu. 2017 [Citado el 24 de Diciembre del 2017]. Disponible en: http://www.medisur.sld.cu/index.php/medisur/announcement/view/6409
• Therrien J, Kim S, Terunuma A, Qin Y, Tock C, Pfutzner W et al. A gene therapy approach for long-term normalization of blood pressure in hypertensive mice by ANP-secreting human skin grafts. Proceedings of the National Academy of Sciences. 2010;107(3):1178-1183.